口服DNA疫苗PCDNA3.1+/FLK-1<,(N1-7)>在抗小鼠结肠腺癌中的实验研究
An Oral DNA Vaccine pcDNA3.1+/flk-1_(n1-7) Against Colonic Adenocarcinoma of Mouse
目的：研究抗肿瘤血管生成口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1<,(n1-7)>抗BALB/c小鼠结肠腺癌生长和转移的作用，并探讨其可能的作用机制。 方法：1．利用重组好的质粒pcDNA3.1+/flk-1<,(n1-7)>转化感受态减毒沙门氏菌SL3261，制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗。2．将小鼠分为三个大组，每个大组内又随机分为疫苗组、空质粒组和生理盐水组，两周内各口服接种三次后，第一大组用CT-26细胞建立结肠癌皮下动物模型，观察小鼠的中位生存期。第二大组用CT-26细胞建立结肠癌皮下动物模型；流式细胞仪分别于接种疫苗前、接种疫苗后、接种CT-26细胞后测血液CD3<''+>值和CD8<''+>值；接种CT-26细胞28天后处死全部小鼠，取出肿瘤，称重，测其体积，免疫组织化学法计数肿瘤微血管密度，观察疫苗对小鼠CT-26细胞皮下肿瘤的抑制作用。第三大组从脾脏下极包膜下接种CT-26细胞，建立结肠癌肝脏转移动物模型；记录小鼠的体重变化；流式细胞仪分别于接种疫苗前、接种疫苗后、接种CT-26细胞后测血液CD44v值；接种CT-26细胞15天后处死全部小鼠，取出肝脏和脾脏，称重，测体积，病理学检查，体视学计数肝脏肿瘤转移灶个数，观察疫苗对小鼠肝转移的抑制情况。 结果：1．成功地将pcDNA3.1+/flk-1<,(n1-7)>转化到减毒沙门氏菌SL3261，制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-l<,(n1-7)>。2．皮下动物模型显示：疫苗组小鼠的中位生存期较空质粒组和生理盐水组分别长25、28天。3．在对皮下动物模型研究中发现：1)流式细胞术示：在接种疫苗前、后三组之间CD3<''+>的值均无显著性差异(P>0.05)；接种肿瘤后空质粒组和生理盐水组较疫苗组明显下降，有显著性差异(P<0.05)；疫苗组CD3<''+>维持较高水平。疫苗接种前三组之间CD8<''+>的值无显著性差异(P>0.05)；疫苗接种后在疫苗组CD8<''+>的值明显的增高，与其它两组对比有显著性差异(P<0.05)；在建立肿瘤模型三周后CD8<''+>的值在疫苗组明显比两对照组高，有显著性差异(P<0.05)。2)疫苗组与空质粒组或生理盐水组的肿瘤重量、体积和微血管密度，均有显著性差异(P<0.05)；而空质粒组与生理盐水组的肿瘤重量、体积和微血管密度之间无显著性差异(P>0.05)。4．在对肝转移动物模型研究中发现：1)流式细胞术示：接种肿瘤细胞前三组的CD44v值无显著性差异(P>0.05)，接种肿瘤细胞后空质粒组和生理盐水组的CD44v明显的比疫苗组高，有显著性差异(P<0.05)。2)体视学分析肝脏肿瘤转移病灶示：疫苗组与空质粒组或生理盐水组的瘤结节数目，均有显著性差异(P<0.05)；而空质粒组与生理盐水组的瘤结节数目之间无显著性差异(P>0.05)。 结论：1．制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗pcDNA3.l+/flk-l<''(nl-7)>。2．该疫苗能延长结肠腺癌皮下动物模型的中位生存期；能显著抑制小鼠结肠腺癌的血管生成；能显著减少小鼠结肠腺癌的肝脏转移灶并抑制其生长。3．该口服DNA疫苗的作用机制，可能是通过激活细胞免疫起到抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤转移作用。
- 作者：
- 杜伟
- 学位授予单位：
- 昆明医学院
- 专业名称：
- 肿瘤学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2006年
- 导师姓名：
- 陈明清；王熙才
- 中图分类号：
- R735.7
- 关键词：
- 血管内皮生长因子受体2；DNA疫苗；结肠腺癌；抗血管生成；转移
- VEGFR2；DNA Vaccine；Colonic Adenocarcinoma；Angiogenesis；Metastasis